Use of MALDI-TOF for identification and surveillance of gramnegative bacteria in captive wild psittacines / Uso do MALDI-TOF para identificação e monitoramento de bactérias Gram negativas em psitacídeos cativos

Microbiological studies of the sanitary and health status of psittacine birds that will be reintroduced is important in evaluating whether these animals act as carriers of pathogenic agents to other animals and humans. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) is a faster and more accurate method to identify bacteria than conventional microbiology methods. The aim of this study was to evaluate the health status of psittacines housed in captivity, by assessment of Gram-negative bacteria from fecal microbiota through MALDI- TOF MS identification. The results indicate high frequency of Gram-negative bacteria in feces (96.5%), especially from the Enterobacteriaceae family (88.7%). The most prevalent bacteria were Escherichia coli (39.0%), Proteus vulgaris (12.2%), Klebsiella spp. (12.1%) and Raoultella ornithinolytica (8.7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. and Escherichia hermannii were isolated with lower frequency. . All these agents are potentially pathogenic for parrots and can cause systemic infections in other animals and humans. These findings reinforce that MALDI- TOF MS proved to be a rapid and accurate method of identification of the microorganism and evaluation of the health status of psittacines, providing relevant data to assist decision-making regarding the sanitary protocols in wildlife centers, and possible future reintroduction of wild birds.

Estudos microbiológicos da sanidade de psitacídeos que serão reintroduzidos são importantes para avaliar se esses animais atuam como portadores de agentes patogênicos para outros animais e humanos. A espectrometria de massa por ionização/dessorção de matriz assistida por laser/tempo de vôo (MALDI-TOF MS) é um método mais rápido e preciso para identificar bactérias na comparação com métodos convencionais de microbiologia. O objetivo deste estudo foi avaliar o estado de saúde de psitacídeos cativos, identificando bactérias Gram-negativas da microbiota fecal por MALDI -TOF MS. Os resultados indicaram alta frequência de bactérias Gram-negativas nas fezes (96,5%), principalmente da família Enterobacteriaceae (88,7%). As mais prevalentes foram Escherichia coli (39,0%), Proteus vulgaris (12,2%), Klebsiella spp. (12,1%) e Raoultella ornithinolytica (8,7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. e Escherichia hermannii foram isolados com menor frequência. Todos esses agentes são potencialmente patogênicos para os papagaios e podem causar infecções sistêmicas em outros animais e seres humanos. Esses achados reforçam que o MALDI- TOF MS é um método rápido e preciso de identificação do microrganismo e avaliação do estado de saúde dos psitacídeos, fornecendo dados relevantes para auxiliar na tomada de decisões sobre os protocolos sanitários em centros de triagem de animais selvagens e sobre a possibilidade de reintrodução futura.

Zoonotic bacteria research and analysis of antimicrobial resistance levels in parrot isolates from pet shops in the city of Fortaleza, Brazil / Pesquisa de bactérias zoonóticas e análise dos níveis de resistência antimicrobiana em isolados de psitacídeos de pet shops da cidade de Fortaleza, Brasil

The Psittaciformes are among the most popular pets due to their intelligence, ability, and ease of maintenance in small environments. However, the absence of adequate environmental stimuli generated by confinement can predispose these animals to characteristic stress conditions, leaving them susceptible to the triggering of various diseases, among which those of bacterial origin stand out. The objective of this study was to carry out a survey of enterobacteria and evaluate the antimicrobial sensitivity profile of bacteria isolated from parrots from a pet shop in the city of Fortaleza, Ceará. Ninety-six samples were collected from four pet shops (which were classified as A, B, C and D), eight samples of local swabs from budgerigar (Melopsittacus undulatus), were collected from each establishment eight from cockatiels (Nymphicus hollandicus) and eight from lovebirds (Agapornis sp.). Isolation of enterobacteria is under the methodology used by Lopes et al. (2015) with modifications. The method used to study bacterial resistance was the Kirby-Bauer method, following the standards stipulated by the Clinical and Laboratory Standards Institute. Sixty-eight enterobacteria strains from ten different species, Proteus mirabilis, Citrobacter diversus, Pantoea agglomerans, Escherichia coli, Providencia stuartii, Hafnia alvei, Proteus vulgaris, Serratia liquefaciens, Enterobacter sakasakii and Citrobacter amalonaticus, were isolated. P. agglomerans was the bacterium with the highest frequency of isolates from pet shop parrots, making up 23.5% of the isolates; the second-most isolated strain was P. mirabilis with 17.7%. In this study, 79% of the isolated strains were resistant to at least one class of antimicrobials tested. Tetracycline proved to be the most resistant antimicrobial (44%), followed by polymyxin B (38%) and nalidixic acid (25%). Among the 68 strains, 19% did not show resistance to any of the classes of antimicrobials tested. The condition of multidrug resistance - resistance to ≥3 classes of antimicrobials - was observed in 18% of the isolated strains.(AU)

Os psittaciformes estão entre os animais de estimação mais populares devido sua inteligência, habilidade, além da facilidade de manutenção da espécie em pequenos ambientes. Contudo, a ausência de estímulos ambientais adequados gerados pelo confinamento, podem predispor esses animais a quadros característicos de estresse, deixando-os susceptíveis ao desencadeamento de várias doenças dentre elas se destacam as de origem bacteriana. O objetivo desse trabalho foi realizar uma pesquisa de enterobactérias e avaliar o perfil de sensibilidade antimicrobiana de bactérias isoladas de psitacídeos de pet shop da cidade de Fortaleza, Ceará. Foram coletadas 96 amostras de quatro pet shops (os quais foram classificados em A, B, C e D), sendo coletados de cada estabelecimento oito amostras de suabes clocais oriundos de periquitos australianos (Melopsittacus undulatus), oito de calopsitas (Nymphicus hollandicus) e oito de agapornis (Agapornis sp.). O isolamento de enterobactérias está de acordo com a metodologia utilizada por Lopes et al. (2015) com modificações. O método utilizado para o estudo de resistência bacteriana foi o de Kirby-Bauer, seguindo os padrões estipulados pela Clinical and Laboratory Standards Institute. Foi isolado um total de 68 cepas de enterobactérias, de dez espécies diferentes, Proteus mirabilis, Citrobacter diversus, Pantoea agglomerans, Escherichia coli, Providencia stuartii, Hafnia alvei, Proteus vulgaris, Serratia liquefaciens, Enterobacter sakasakii e Citrobacter amalonaticus. Pantoea agglomerans foi a bactéria com maior percentagem de frequência dos isolados de psitacídeos de pet shop, perfazendo um total de 23,5% dos isolados, a segunda cepa mais isolada foi Proteus mirabilis com 17,7%. Neste estudo 79% das cepas isoladas foram resistentes a pelo menos uma classe de antimicrobianos testados, tetraciclina demonstrou ser o antimicrobiano com maior resistência (44%), seguido da polimixina B (38%) e do ácido nalidíxico (25%). Dentre as 68 cepas isoladas, 19% não apresentaram resistência a qualquer uma das classes de antimicrobianos testadas. A condição de multirresistência, ou seja, resistência a ≥3 classes de antimicrobianos foi observado em 18% das cepas isoladas.(AU)

Antimicrobial susceptibility profile of enterobacteria isolated from wild grey-breasted parakeets (Pyrrhura griseipectus) / Perfil de susceptibilidade antimicrobiana de enterobactérias isoladas de periquitos-de-cara-suja (Pyrrhura griseipectus)

The grey-breasted parakeet (Pyrrhura griseipectus) is an endangered psittacine species that have been affected by illegal trade and deforestation. Currently, this endemic species is only found in three areas in Ceará state, in Brazil. This study aimed to investigate the frequency and diversity of Enterobacteriaceae in wild adult grey-breasted parakeets and determine their susceptibility to antimicrobial agents. Cloacal swab samples were collected from 27 individuals and environmental swabs (drag swabs) from five nests used by these birds. Twenty-seven strains from nine species of Enterobacteriaceae were recovered from cloacal swabs, and the most prevalent bacteria strains were Hafnia alvei (22%) and Pantoea agglomerans (22%). From environmental nest samples, seven strains from three bacterial species were isolated, being the P. agglomerans the most frequent species (100%). Twenty-two of the 27 isolates (81.4%) exhibited antibiotic resistance, varying from one to eight of the 12 antimicrobials commonly used. Resistance to amoxicillin was the most prevalent (70.4%), followed by azithromycin (22.2%) and ceftriaxone (18.5%). None of the strains were resistant to gentamicin, tobramycin, ciprofloxacin or tetracycline. The H. alvei was the main species presenting multidrug resistance, including resistance against meropenem, which is an important finding. These results could provide interesting information on the health of these endangered wild grey-breasted parakeets. They could also indicate that the obtained isolates are part of a group of bacteria that are typical components of the enteric microbiota of birds, which present elevated rates of resistance to amoxicillin.(AU)

O periquito-de-cara-suja (Pyrrhura griseipectus) é uma espécie de psitacídeo considerado pela IUCN como ameaçado de extinção, resultado do comércio ilegal e do desmatamento. Atualmente, essa espécie endêmica é encontrada apenas em três áreas no estado do Ceará, Brasil. O objetivo deste estudo foi investigar a frequência e a diversidade de Enterobacteriaceae em periquitos de peito cinza adultos selvagens e determinar sua suscetibilidade a agentes antimicrobianos. Amostras de suabes cloacais foram coletadas de 27 indivíduos e de suabes ambientais (suabes de arrasto) de cinco ninhos utilizados por essas aves. Vinte e sete cepas de nove espécies de Enterobacteriaceae foram isoladas a partir de suabes cloacais, sendo as cepas bacterianas mais prevalentes Hafnia alvei (22%) e Pantoea agglomerans (22%). Das amostras ambientais de ninhos foram isoladas sete linhagens de três espécies bacterianas, sendo P. agglomerans a espécie mais frequente (100%). Vinte e dois dos 27 isolados (81,4%) exibiram resistência a antibióticos, variando de um a oito dos 12 antimicrobianos comumente usados. A resistência a amoxicilina foi a mais prevalente (70,4%), seguida por azitromicina (22,2%) e ceftriaxona (18,5%). Nenhuma das cepas era resistente à gentamicina, tobramicina, ciprofloxacina ou tetraciclina. H. alvei foi a principal espécie que apresentou resistência a múltiplas drogas e que também esteve associada a um outro achado relevante desta pesquisa, que foi a detecção de um caso de resistência ao meropenem. Esses dados fornecem informações relevantes sobre a saúde desses periquitos selvagens ameaçados e permite concluir que os isolados obtidos fazem parte de um grupo de bactérias que normalmente compõe a microbiota entérica das aves, sendo a amoxicilina envolvida em elevadas taxas de resistência.(AU)

Companion psittacine birds as reservoir of gentamicin and vancomycin-resistant Enterococcus spp / Psitacídeos de companhia como reservatórios de Enterococcus spp. gentamicina e vancomicina-resistentes

Enterococcus are recognized worldwide as significant nosocomial agents that have been continuously envolving to adapt to different niches and acquire resistance to several antibiotic classes. Vancomycin and gentamicin-resistant strains of E. faecalis and E. faecium have been associated with nosocomial human infections. Some epidemiological studies suggest the participation of pets as reservoirs of vancomycin and gentamicin-resistant Enterococcus strains. However, the role of companion birds as reservoirs of these strains has been poorly studied. In this study, 126 psittacine birds were evaluated and 26.9% carried Enterococcus spp., including the species E. faecalis, E. faecium, E. hirae, E. phoeniculicola, E. gallinarum and E. casseliflavus. The antibiotic resistance profile showed four high-level gentamicin-resistance (HLGR) strains. In addition, two strains presented intermediate levels of vancomycin resistance. Resistant strains were isolated from fecal and oropharynx samples of sick and clinically healthy birds, suggesting that psittacine birds may act as reservoirs of HLGR Enterococcus spp. However, sick birds appear to be more implicated in the enterococci transmission than healthy birds.(AU)

Enterococcus são reconhecidos mundialmente como significantes agentes nosocomiais, que têm continuamente se adaptado a diferentes nichos e adquirido resistência a várias classes de antibióticos. Cepas de E. faecalis e E. faecium vancomicina e gantamicina-resistentes têm sido associadas a infecções nosocomiais em humanos. Alguns estudos epidemiológicos sugerem a participação de aves como reservatórios de cepas de Enterococcus vancomicina e gentamicina-resistentes. Entretanto, a relação das aves de companhia como reservatórios destas cepas tem sido pouco estudada. Neste estudo, 126 psitacídeos foram avaliados, e 26,9% destes eram portadores de Enterococcus spp., incluindo as espécies E. faecalis, E. faecium, E. hirae, E. phoeniculicola, E. gallinarum e E. casseliflavus. O perfil de resistência antibiótica mostrou quatro cepas com alto nível de resistência a gentamicina (ANRG). Além de duas cepas com nível intermediário de resistência a vancomicina. As cepas resistentes foram isoladas de amostras fecais e de orofaringe de aves doentes e clinicamente saudáveis, sugerindo que psitacídeos podem estar atuando como reservatórios para Enterococcus spp. com ANRG. Contudo, Aves doentes parecem estar mais relacionadas à transmissão de enterococcus, do que aves saudáveis.(AU)

Yeasts and filamentous fungi in psittacidae and birds of prey droppings in midwest region of Brazil: a potential hazard to human health / Leveduras e fungos filamentosos em excretas de psittacideos e aves de rapina em cativeiro na região centro-oeste do Brasil: um risco potencial para a saúde humana

Abstract Birds of prey and from Psittacidae family are host to fungal microbiota and play an important role in the epidemiology of zoonoses. Few studies in the literature have characterized mycelial and yeast fungi in the droppings of these birds and correlated the isolates with the zoonotic potential of the microorganisms. Droppings from 149 birds were evaluated and divided into two groups: captive: Rhea americana araneipes, Primolius maracana, Ara ararauna, Ara chloropterus, Anodorhynchus hyacinthinus, Amazona aestiva, Ara macao macao, Ramphastos toco, Sarcoramphus papa, Busarellus nigricollis, Bubo virginianus nacurutu, Buteogallus coronatus, Buteogallus urubitinga urubitinga, Spizaetus melanoleucus, Spizaetus ornatus ornatus, Buteo albonotatus, Geranoaetus albicaudatus albicaudatus, Rupornis magnirostris magnirostris and Harpia harpyja, and quarantined birds: Amazona aestiva and Eupsitulla aurea. The fungal isolates were identified according to macroscopic (gross colony appearance), micromorphological and biochemical characteristics. Among birds displayed in enclosures, Aspergillus niger (41.1%) and Candida kefyr (63.8%) were the fungi most frequently isolated in Harpia harpyja and Ramphastos toco, respectively. For quarantined birds, the following percentages were observed in Eupsittula aurea , (76.6%) C. krusei, (84.4%) C. kefyr and (15.2%) C. famata, while in Amazona aestiva, (76.2%) C. krusei was observed. These findings indicate potentially pathogenic species in the bird droppings assessed, which constitute a risk of exposure for keepers and individuals who visit the zoo. Birds of the Cerrado and Pantanal of Mato Grosso (Central Western region of Brazil) could act in the epidemiological chain of important zoonoses.

Resumo Aves de rapina e psitacídeos são hospedeiras de uma rica microbiota fúngica e desempenham um papel importante na epidemiologia de zoonoses. Poucos estudos na literatura têm caracterizado fungos micelianos e leveduras nos excrementos de pássaros e correlacionados estes isolados com o potencial zoonótico dos microrganismos isolados. Excrementos de 149 aves foram divididas e avaliados em dois grupos: Em cativeiro: Rhea americana araneipes, Primolius maracana, Ara ararauna, Ara chloropterus, Anodorhynchus hyacinthinus, Amazona aestiva, Ara macao macao, Ramphastos toco, Sarcoramphus papa, Busarellus nigricollis , Bubo virginianus nacurutu, Buteogallus coronatus, Buteogallus urubutinga urubitinga, Spizaetus melanoleucus, Spizaetus ornatus ornatus, Buteo albonotatus, Geranoaetus albicaudatus albicaudatus, Rupornis magnirostris magnirostris e Harpia harpyja e aves em quarentena: Amazona aestiva e Eupsittula aurea). Os isolados de leveduras e de fungos micelianos foram identificados em observações macroscópicas (aspectos das colônias), características micromorfológicas e bioquímicas. Entre as aves indicadas em compartimentos, Aspergillus niger (41,1%) e Candida kefyr (63,8%) foram os fungos mais isolada em Harpia harpyja e Ramphastos toco, respectivamente. Para as aves em quarentena, os seguintes percentuais foram observados em Eupsittula aurea (76,6%) C. krusei, (84,4%) C. kefyr e (15,2%) C. famata, enquanto em Amazona aestiva (76,2%) de C. krusei foi observada. Estes resultados indicam a presença de espécies potencialmente patogênicos nas excretas das aves avaliadas, constituem um risco a exposição para os criadores e pessoas que visitam o zoológico. Aves do Pantanal e do Cerrado de Mato Grosso (região Centro-Oeste do Brasil) poderia atuar na cadeia epidemiológica das zoonoses importantes.

Serogroup identification, phenotypic detection of hemolysis and extended spectrum beta-lactamases of Escherichia coli isolated from psittacine of illegal wildlife trade in Fortaleza, Brazil / Identificação de sorogrupo e detecção fenotípica de betalactamase de espectro estendido e produção de hemolisina em Escherichia coli isoladas de psitacídeos do tráfico de animais silvestres em Fortaleza-CE

This study aimed to identify serogroups of Escherichia coli important for human health in isolates from psittacine of illegal wildlife trade in Ceará State. In addition, hemolysis and production of Extended Spectrum Beta-Lactamases (ESBL) was assessed in the isolates. A total of 78 E. coli strains isolated from different Psittaciformes species from a wildlife rehabilitation center in Fortaleza, Brazil. The isolates used in this study were previously identified and stored. Serogroup identification was performed using polyvalent sera for EPEC (O55, O111, O119, O114, O125, O86, O126, O127, O128), EIEC (O136, O124) and EHEC (O157). ESBL detection was performed with double disk synergy method. For hemolysis detection, isolates were inoculated in blood agar base enriched with ovine blood. Only 31 (39.7%) isolates were seropositive and the most frequent were O127, O114, O128 and O111. There was no agglutination for serogroups O55, O124, O136 or O157. Considering both seropositive and seronegative isolates, 9 (11.5%) and 35 (44.9%) presented hemolysis and ESBL production, respectively. In conclusion, the investigated psittacine from illegal wildlife trade hosted ESBL-producing E. coli strains and some belong to important serogroups often linked to severe human infections.(AU)

Este trabalho teve como objetivo identificar sorogrupos de E. coli importantes para a saúde humana, oriundos de psitacídeos provenientes do tráfico no estado do Ceará, assim como detectar atividade hemolítica e produção de betalactamase de espectro estendido (ESBL). Foram testadas 78 cepas de Escherichia coli provenientes de psitaciformes do Centro de Triagem de Animais Silvestres, Fortaleza, CE. Para a identificação dos sorogrupos, utilizaram-se soros polivalentes EPEC (O55, O111, O119, O114, O125, O86, O126, O127, O128), EIEC (O136, O124) e EHEC (O157). Para detecção de ESBL, as cepas foram submetidas ao método de aproximação de disco e, para a detecção de hemolisina, foram plaqueadas em ágar sangue base enriquecido com sangue de carneiro. No geral, 31 (39,7%) das amostras foram soropositivas. Os sorogrupos mais frequentemente detectados foram O127, O114, O128 e O111. Não houve positividade para os sorogrupos O55, O124, O136 e O157. Considerando-se as amostras sororreagentes e não sororreagentes, observou-se que nove (11,5%) e 35 (44,9%) cepas de E. coli apresentaram produção de hemolisinas e de ESBL, respectivamente. Em conclusão, constatou-se que psitacídeos provenientes do tráfico de animais silvestres albergam cepas de E. coli produtoras de ESBL e providas de importantes sorogrupos implicados em graves infecções humanas.(AU)

Pesquisa de Mycoplasma em aves da família Psittacidae mantidas em diferentes cativeiros no Brasil Central / Research of Mycoplasma in the family Psittacidae kept in different captivities in Central Brazil

O presente estudo teve como objetivo investigar a presença de Mycoplasma gallisepticum e M. synoviae em diferentes espécies de psitacídeos cativos no Brasil Central. Um total de 300 amostras foram coletadas e corresponderam a 41 espécies de psitacídeos da fauna brasileira, provenientes do CETAS, criadouro comercial e criadouro conservacionista. Quatorze espécies apresentaram amostras positivas para M. gallisepticum destacando a maracanã-verdadeira (Primolius maracana) (01/02, 50%), a arara-canindé (Ara ararauna) (15/48, 33,3%) e a jandaia-verdadeira (Aratinga jandaia) (03/10, 30%). Amostras do CETAS obtiveram total de 21,62% (16/74) de amostras positivas, do criadouro comercial 15,7% (19/121) e do criadouro conservacionista 6,66% (7/105). Apenas três espécies foram positivas para M. synoviae sendo essas, a maracanã-pequena (Primolius maracana) (1/10 - 10%), arara-macao (Ara macao) (1/12, 8,3%) e arara-canindé (Ara ararauna) (2/48, 4,1%). O CETAS obteve 2,7% (2/74) de amostras positivas totais, enquanto o criadouro conservacionista obteve total de 1,9% (2/105) de amostras. Não ocorreram amostras positivas para M. synoviae no criadouro comercial. Os resultados mostraram um considerável número de amostras positivas para M. gallisepticum em espécies da família Psittacidae, indicando que estes animais podem ser uma fonte de infecção silenciosa para outras aves, uma vez que não apresentaram sintomatologia clínica.(AU)

The study aimed to investigate the presence of Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae in different species of captive parrots, in Central Brazil. A total of 300 samples were collected from 41 brazilian species of Psittacidae at three captivities: Centro de Triagem de Animais Silvestres (CETAS), a conservation and a commercial captivity. Fourteen species presented positive samples for M. galisepticum, the most affected were blue-winged macaw (Primolius maracana) (01/02, 50%), blue-and-yellow macaw (Ara ararauna) (15/48, 33.3%), and jandaia parakeet (Aratinga jandaia) (03/10, 30%). CETAS facility showed 21.62% (16/74) of positive samples, while the commercial captivity showed 15.7% (19/121), and the conservation captivity 6.66% (7/105). Only three species presented positive samples for M. synoviae: blue-winged macaw (Primolius maracana) (1/10, 10%), scarlet macaw (Ara macao) (1/12, 8.3%) e blue-and-yellow macaw (Ara ararauna) (2/48, 4.1%). CETAS facility showed 2.7% (2/74) of positive samples, while the conservation captivity presented 1.9% (2/105), and no positive samples were found in the commercial captivity. Results showed a considerable number of positive samples for M. galisepticum in species of Psittacidae family, indicating that these animals can be a silent source of infection for other birds, since they did not present clinical symptoms.(AU)

Detecção e avaliação do perfil de sensibilidade antimicrobiana de enterobactérias isoladas de periquitos cara-suja (Pyrrhura griseipectus) em cativeiro / Detection and evaluation of the antimicrobial sensibility profile of enterobacteria isolated from captive Grey-breasted parakeet (Pyrrhura griseipectus)

This study was conducted to detect enterobacteria in captive Grey-breasted parakeet from a commercial breeding located in the state of Ceara. 25 individual cloacal swabs were collected and this material was subjected to microbiological processing to obtain the bacterial isolation, identification, and evaluation of the sensitivity profile to antimicrobials. The bacterial isolation in ten samples was determined, belonging to the genera Enterobacter, Hafnia, Serratia, Escherichia, Pantoea and Klebsiella, in which these last three corresponded to the bacteria most isolated, with respective percentages of 28.6%, 21.4%, and 21.4%. As for the sensitivity profile, antibiotics to which the bacteria showed more resistance were trimethoprim-sulfamethoxazole (57%), tetracycline (21%), and azithromycin (43%). Thus, it was shown that the parakeets were carriers of Enterobacteriaceae with resistance characteristics.(AU)

O uso da microbiologia como ferramenta para a conservação de aves ameaçadas: dados preliminares para o papagaio-de-cara-roxa, Amazona brasiliensis (aves: Psittacidae) no Paraná / Use of microbiology as a tool for the preservation of threatened bird species: preliminary data for the red-tailed amazon, Amazona brasiliensis (birds: Psittacidae) in Paraná / El uso de la microbiología como herramienta para la conservación de aves amenazadas: datos preliminares para el loro de cara púrpura, Amazona brasiliensis (aves: Psittacidae) en Paraná

Amazona brasiliensis, também conhecido popularmente como papagaio-de-cara-roxa, é uma espécie de Psittacidae endêmica da Mata Atlântica distribuída entre o litoral sul de São Paulo e o litoral Norte de Santa Catarina. Este estudo foi concentrado no estado do Paraná, visando uma prévia caracterização do perfil sanitário natural em filhotes da população por meio de análises microbiológicas. O estudo epidemiológico de uma espécie ameaçada inicia-se com a determinação dos agentes infecciosos comuns na população, que provavelmente co-evoluíram com a espécie e representam baixo risco aos espécimes de vida livre. Do total de colônias isoladas quase 75% foram positivas para a família Enterobacteriaceae. Normalmente, a microbiota entérica de psitacídeos é composta por micro-organismos Gram-positivos, porém a alta porcentagem de Gram-negativas isoladas pode ser explicada pela diferença entre a composição microbiana de adultos e filhotes. Seria interessante um estudo mais detalhado para uma eventual comparação entre possíveis sinais clínicos e micro-organismos presentes em cada indivíduo amostrado.(AU)

Amazona brasiliensis, also popularly known as Red-tailed Amazon, is an endemic species to the Atlantic Forest. This Psittacidae range goes from the south coast of São Paulo state to the northern coast of Santa Catarina state. This study focuses on the population in the state of Paraná, aiming to perform a preliminary characterization of the prevalence of natural pathogens in nestlings through microbiological analyses. The epidemiological study of an endangered species begins with the determination of common infectious agents within the population, which probably co-evolved with the species and represent a low risk to free-living specimens. Almost 75% of the colonies isolated were positive for Enterobacteriaceae. Usually, the enteric microbiota of psittacidae consists of Gram-positive microorganisms, but the high percentage of isolated Gram-negative bacteria can be explained by differences between the microbial composition of adults and nestlings. It would be interesting to further develop this study into a more detailed comparison between possible clinical signs and microorganisms present in each individual sampled.(AU)

Amazona brasiliensis, popularmente conocido como el loro de cara púrpura, es una especie endémica de Psittacidae de la Mata Atlántica distribuido entre la costa sur de São Paulo y la costa norte de Santa Catarina. Este estudio se concentra en el estado de Paraná, buscando caracterizar preliminarmente el perfil sanitario natural en crías de la población, por medio del análisis microbiológico. El estudio epidemiológico de una especie amenazada comienza con la determinación de agentes infecciosos comunes en la población, que probablemente ha evolucionado con la especie y representan un riesgo bajo para especímenes de vida libre. Del total de colonias aisladas casi el 75% fueron positivos para Enterobacteriaceae. Normalmente, la microbiota entérica de loros se compone de microorganismos Gram positivos, pero el alto porcentaje de aislados Gram negativas se puede explicar por la diferencia entre la composición microbiana de adultos y pichones. Sería interesante un estudio más detallado para una posible comparación entre los síntomas clínicos y los microorganismos presentes en cada individuo muestreado.(AU)

Diagnóstico imuno-histoquímico e caracterização anatomopatológica de clamidiose em psitacídeos / Immunohistochemical diagnosis and pathological characterization of chlamydiosis in psittacine

A clamidiose é causada por Chlamydophila psittaci e representa uma das principais zoonoses de origem aviária. Realizou-se um estudo retrospectivo em psitacídeos do período de 1995 a 2012 e exame imuno-histoquímico (IHQ) anti-Chlamydia. Foram avaliados 111 casos, dos quais 12 foram a óbito devido à clamidiose. As aves eram provenientes de apreensão ou cativeiro (zoológicos, criatórios, centros de triagem e domicílios). À necropsia observou-se fígado aumentado (4/12) com áreas branco-amareladas (3/12), baço aumentado (2/12) e rompido (1/12), saco pericárdico com deposição de fibrina (1/12), polisserosite fibrinosa (1/12) e em três casos não havia lesões. Na avaliação histopatológica evidenciou-se hepatite necrótica mononuclear (7/12), hepatite mononuclear (3/12), hiperplasia de ductos biliares (8/12), esplenite necrótica histiocitária (9/12), hemossiderose em fígado (9/12) e baço (9/12), aerossaculite mononuclear (4/12), pericardite fibrino-heterofílica (2/12), necrose (1/12) e rarefação (1/12) linfoide de bursa de Fabricius, pneumonia fibrinosa (1/12), nefrite mononuclear (1/12) e granulomas renais (1/12). Observaram-se inclusões basofílicas intracitoplasmáticas (corpos elementares) em fígado (2/12), baço e rins (1/12). Evidenciou-se imunomarcação anti-Chlamydia em fígado (11/12), baço (7/9), pulmões (3/9), rins (2/8), intestinos (2/3), sacos aéreos (1/4) e bursa de Fabricius (1/2). A IHQ poderá ser utilizada como forma de diagnóstico definitivo post mortem de clamidiose em psitacídeos no Brasil...

Chlamydiosis is caused by Chlamydophila psittaci and is one of the most important avian zoonosis. A retrospective study in psittacines was performed from 1995 to 2012 with immunohistochemistry (IHC) anti-Chlamydia. Hundred eleven cases were evaluated and twelve birds died due to chlamydiosis. The birds were obtained from illegal commerce traffic or captive conditions (zoos, breeding birds, wildlife rehabilitation center and pets). Grossly, there were hepatomegaly (4/12) with yellowish-white areas (3/12), splenomegaly (2/12), splenic rupture (1/12), fibrin deposition in pericardial sac (1/12), fibrinous polyserositis (1/12), and in three cases lesion was not found. Histopathological evaluation revealed mononuclear necrotizing hepatitis (7/12), mononuclear hepatitis (3/12), biliary duct hyperplasia (8/12), histiocytic necrotizing splenitis (9/12), hemosiderosis in liver (9/12) and spleen (9/12), mononuclear aerosaculitis (4/12), fibrin heterophilic pericarditis (2/12), lymphoid necrosis (1/12) and depletion of bursa Fabricius (1/12), fibrinous pneumonia (1/12), mononuclear nephritis (1/12), and renal granulomas (1/12). Basophilic intracytoplasmic inclusions (elementary bodies) were observed in liver (2/12), spleen and kidney (1/12). Positive immunostaining for Chlamydia could be detected in liver (11/12), spleen (7/9), lung (3/9), kidney (2/8), intestines (2/3), air sacs (1/4) and bursa of Fabricius (1/2). It was concluded that IHC can be used as postmortem definitive diagnosis of chlamydiosis in psittacines...

Detecção de fatores de virulência de Escherichia coli e análise de Salmonella spp. em psitacídeos / Detection of virulence factors in Escherichia coli and analysis of Salmonella spp. in psittacines

The enteric flora of psittacines is mainly composed of Gram positive bacteria. Gram negative bacteria, like Escherichia coli and Salmonella spp., have a high pathogenic potential and can be considerate as an indicative of management problems that may culminate in disease manifestation due to stress factors, poor diets and overcrowding, in combination with a high bacterial load on the environment. The objective of this study was evaluated the presence of Salmonella spp., Escherichia coli and the virulence genes iss and iutA from E. coli isolates. Forty-four samples were analyzed from psittacines living in captivity, which fifteen samples were from organs fragments of necropsied birds, and twenty-nine were from cloacal and crop swabs of red-spectacled parrots (Amazona pretrei) keeping in captivity. No samples were positive for Salmonella spp. In the samples in which E. coli was detected, both virulence factors (genes iss and iutA) were present.

A flora entérica dos psitacídeos é composta principalmente por bactérias Gram positivas. Bactérias Gram negativas, como Escherichia coli e Salmonella spp., apresentam elevado potencial patogênico, sendo consideradas indicativo de problemas de manejo, que poderão culminar em manifestação de doenças em decorrência de fatores estressantes, dietas deficientes e superlotação, combinados com alta carga bacteriana no ambiente. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de Salmonella spp., Escherichia coli e os fatores de virulência dos genes iss e iutA dos isolados de E. coli. Analisou-se um total de 44 amostras provenientes de psitacídeos criados em cativeiro, sendo estas 15 fragmentos de órgãos de aves submetidas a exame de necropsia e também 29 amostras de swabs de cloaca e inglúvio de papagaios-charão (Amazona pretrei) criados em cativeiro. Nenhuma amostra foi positiva para Salmonella spp. Nas amostras de E. coli detectou-se ambos os fatores de virulência pesquisados.

Molecular detection of enteropathogenic Escherichia coli in asymptomatic captive psittacines / Detecção molecular de Escherichia coli enteropatogênica em psitacídeos assintomáticos em cativeiro

Psittaciformes are one of the most endangered groups of birds, and several Brazilian species are classified between vulnerable and critically endangered. It is thus necessary to identify agents that cause infections in captive wild animals and to assess the risks posed thereof and to design interventions to minimize the possibility of disease outbreaks, leading to the conservation of endangered species. The purpose of this study was to identify enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) cloacal isolates from asymptomatic psittacines in captivity and evaluate the distribution of the EPEC pathotype. Cloacal swabs were obtained from 46 asymptomatic birds, and resulting isolates were tested by polymerase chain reaction (PCR) for the presence of the attaching and effacing gene (eae) and bundle-forming pilus structural gene (bfpA) of EPEC. Samples from several species were tested, and three samples were found to be positive for the eae and bfpA genes and characterized as typical EPEC. This is the first report of this pathotype in asymptomatic psittacines. Although certain E. coli strains are more pathogenic than others, various factors should be considered when determining the potential of E. coli isolates to cause disease in captive psittacines. Birds that are positive for the EPEC (typical) strain could be zoonotic sources of infection, and may have acquired these strains through contact with humans or domestic animals. These findings may also be valuable for the long-term management of endangered species ex situ as one EPEC sample was isolated from a Red-tailed Amazon (Amazona brasiliensis).

Os psitacídeos são um dos grupos de aves mais ameaçadas no mundo e diversas espécies brasileiras são classificadas desde vulneráveis à criticamente ameaçadas de extinção. Torna-se, portanto, necessário identificar os agentes que causam infecções em animais selvagens em cativeiro e determinar os riscos relacionados de modo a intervir sobre os fatores envolvidos para diminuir a possibilidade de surtos de doenças e promover a conservação de espécies ameaçadas. O objetivo deste estudo foi identificar Escherichia coli Enteropatogência (EPEC) de isolados cloacais de psitacídeos assintomáticos em cativeiro e avaliar a distribuição do patotipo EPEC. Suabes cloacais foram coletados de 46 psitacídeos assintomáticos e os isolados foram testados pela reação em cadeia pela polimerase (PCR) para a presença do gene attaching and effacing (eae) e bundle forming pilus (bfpA) de EPEC. Amostras oriundas de diversas espécies foram testadas e três amostras resultaram positivas para os genes eae e bfp e caracterizadas como EPEC típicas. Esse é o primeiro relato em psitacídeos assintomáticos para esse patotipo. Apesar de que algumas cepas de E.coli serem mais patogênicas do que outras, diversos fatores devem ser considerados para determinar o potencial de isolados de E.coli de causar doença em psitacídeos em cativeiro. Aves positivas para cepas de EPEC (típicas) poderiam ser fontes de infecção zoonóticas e adquirir essas cepas através do contato com humanos e animais domésticos. Esses achados também podem ser valiosos para o manejo a longo prazo de espécies ameaçadas ex situ já que uma amostra de EPEC foi isolada de um Papagaio-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis).

Primera evidencia de circulación de Chlamydophila psittaci en Colombia: posible riesgo de salud pública / First evidence of Chlamydophila psittaci circulation in Colombia: a possible public health risk

Objetivo Establecer la seroprevalencia de Chlamydophila psittaci en aves del género Amazona spp y en trabajadores de algunos zoológicos y CAV (centros de atención y valoración de fauna silvestre). Metodología Se analizaron 138 sueros de aves del género Amazona spp, 24 sueros de otras especies de aves y 39 sueros humanos por ELISA indirecta. Se utilizó el antígeno RMOMP (major outer membrane protein of Chlamydophila psittaci). Para el conjugado de aves se utilizo una anti-IgG de turkey-chicken marcado con biotina para el conjugado humano se utilizo una anti-IgG marcada con peroxidasa. Los sueros fueron diluidos 1:100. Resultados De los 138 sueros de aves del género Amazona spp 118 (85 por ciento) resultaron positivos. La seroprevalencia por región fue la siguiente: CAV Torre cuatro de Caldas 36 (90 por ciento), Zoológico de Barranquilla 14 (87 por ciento), CAV Montería 28 (85 por ciento), Zoológico de Cali 21 (84 por ciento) y CAV Victoria del Oriente Caldense 19 (79 por ciento). En humanos la seroprevalencia total fue del 78 por ciento (30/39) la distribución fue la siguiente: CAV Montería 9 trabajadores (100 por ciento), Zoológico de Barranquilla 9 (90 por ciento), CAV Torre 4 de Caldas 4 trabajadores (80 por ciento), CAV Victoria del Oriente Caldense 3 (75 por ciento) y 5 (45 por ciento) trabajadores del Zoológico de Cali. Conclusiones La alta seroprevalencia de Chlamydophila psittaci en aves (86,4 por ciento) y humanos (78 por ciento) representa la primera evidencia de la circulación de este microorganismo en Colombia, la presencia del agente etiologico de la ornitosis podría representar un riesgo de salud publica.

Objective To establish the seroprevalence of Chlamydophila psittaci in birds of Amazona spp genus and workers from some zoos and CAVs (centers for attention and evaluation of wildlife) of Colombia. Methods We analyzed 138 sera from birds of the genus Amazona spp, 24 sera from other species of birds and 39 human sera by indirect ELISA. RMOMP was used as antigen (major outer membrane protein of Chlamydophila psittaci). For the conjugate of birds it was used an anti-turkey-chicken IgG labeled with biotin, for the human conjugate we used an anti-IgG labeled with peroxidase. Sera were diluted 1:100. Results Of the 138 sera from birds of the genus Amazona spp 118 (85 percent) were seropositive. Regional seroprevalence was as follow: Caldas CAV Torre cuatro 36 (90 percent), CAVâs Monteria 28 (85 percent), Barranquillaâs Zoo 14 (87 percent), Caliâs Zoo 21 (84 percent) and from the CAV Victoria del Oriente Caldense 19 (79 percent) sera were seropositive. Regarding seroprevalence in humans, 30 of the 39 (78 percent) were seropositive, regional seroprevalence was as follow: Montería 9 (100 percent) workers, Barranquillaâs Zoo 9 (90 percent), CAV Caldas Tower four 4 (80 percent), Caliâs Zoo 5 (45 percent) and CAV Caldense Victoria del oriente 3 (75 percent) were seropositive. Conclusions The high seroprevalence of Chlamydophila psittaci in birds (86,4 percent) and humans (78 percent) showed the first evidence of circulation of this microorganism in Colombia; the circulation of the etiological agent of psittacosis may represent a public health risk.

Detecção de Escherichia coli e Salmonella spp. em microbiota intestinal de Psittaciformes em fase de reabilitação para soltura / Detection of Escherichia coli and Salmonella spp. in the intestinal microbiot of Psittacifomes in rehabilitation process for wildlife reintroduction

A Escherichia coli é uma bactéria pertencente à família Enterobacteriacea que faz parte da microbiota entérica de mamíferos e de muitas espécies de aves. A Salmonella spp. também pertence à mesma família, sendo responsável por surtos de infecção alimentar em humanos e frequentemente isoladas de aves domésticas e aves silvestres. O presente estudo analisou a frequência de ambas as bactérias em Psittaciformes em processo de reabilitação para a vida livre. De 89 aves analisadas 19% estavam infectadas com E. coli e 1,12% com Salmonella spp. Realizou-se uma análise do perfil de resistência a antibióticos onde se observou a eficiência de estreptomicina, tetraciclina, trimetoprim e gentamicina sobre as amostras. As amostras de E. coli foram submetidas ao teste de Vermelho-Congo e ao teste Atividade Hemolítica, onde se observaram 70,6% de amostras positivas para o primeiro e 53% para o segundo teste.

Escherichia coli is a bacteria of the Enterobacteriacea family and it is part of the enterical microflora of mammals and of many species of birds. Salmonella spp. also belongs to the family Enterobacteriacea, it is responsible for human feed toxinfection outbreaks and usually isolated from domestic and wild birds. The present study analyzed the frequency of both agents in Psittaciformes in rehabilitation process for wildlife reintroduction. In 89 birds analyzed, 19% were infected with E. coli and 1,12% with Salmonella spp. It was carried out an analysis of the profile of antibiotic resistance in which was observed the efficiency of estreptomicin, tetraciclin, trimetoprim and gentamicin over the samples. The samples of E. coli were submitted to the Congo Red Binding test and to the Hemolisis test and 70,6% of positive samples for the first test and 53% for the second one were observed.

Pesquisa de Cryptococcus neoformans e Candida spp. em excretas de psitacídeos e passeriformes cativos / Research on Cryptococcus neoformans and Candida spp. in the excretas of captive psittacisittacines and passeriformes / Investigación de Cryptococcus neoformans y Candida spp. en excretas de psittacidae y psittaciformes cautivos

As leveduras podem causar diversas doenças no homem e animais. Nas aves, as leveduras estão envolvidas principalmente em lesões no trato respiratório e digestório. Entre as leveduras patogênicas, Cryptococcus neoformans vem se destacando pela alta prevalência de criptococose humana em pacientes imunodeprimidos. Assim, os objetivos deste estudo foram identificar C. neoformans e outras leveduras patogênicas na cloaca e coana de passeriformes e psitaciformes e em excretas coletadas do fundo de gaiolas de aviários. Foram obtidas 29 amostras de 15 aves manifestando algum sinal respiratório, provenientes do Ambulatório de Animais Selvagens da UFPR (n=6) e da Clínica Veterinária Vida Livre (n= 23). As amostras foram semeadas em Ágar Sabouraud e Ágar Níger e mantidas a 300ºC por até 30 dias. Todas as colônias foram analisadas quanto à macro e micromorfologia. Para aquelas identificadas como leveduras, foram realizadas as provas bioquímicas: assimilação de carbono e nitrogênio e formação de tubo germinativo para identificação de Candida albicans. As amostras de excreta dos aviários (n=8) foram misturadas com solução fisiológica contendo antibiótico e o sobrenadante foi semeado em Ágar Níger. Nenhuma amostra das aves apresentou resultado positivo para C. neoformans, porém identificaram-se amostras positivas para C. albicans (duas amostras de coana), C. famata (uma amostra de coana) e C. tropicalis (uma amostra de coana). As excretas foram negativas para C. neoformans. Portanto, apesar de não ter sido isolado C. neoformans, outras leveduras patogênicas foram isoladas, demonstrando a importância dessas aves como possíveis veiculadoras de doenças para humanos.

The yeasts can cause many diseases in man and animals. On birds, the yeasts are involved mainly in respiratory and digestive tract lesions. Among pathogenic yeast, Cryptococcus neoformans is an important cause of human cryptococcisis associated with immunocompromised states. The purpose of this study is to identify the occurrence of C. neoformans and other pathogenic yeasts in cloacae and choana from passeriformes and psittacines as well as in excretas from poultry cages. Twenty nine samples from fifteen birds showing some respiratory symptom, from Veterinary Hospital of UFPR (n = 6) and Vida Livre Veterinary Clinic (n = 23), were collected. The samples were spread in Sabouraud dextrose Agar and Staib medium and kept at 30°C and observed for 30 days. All colonies were analyzed with respect to its micro and macromorphology. Biochemical assays were conducted for samples presenting yeasts: carbon and nitrogen assimilation profile and germ tube for Candida albicans identification. Samples from birds’ extracts (n = 8) were diluted in sterile saline solution with antibiotic and the supernatant was inoculated in spread on Niger seed agar. All samples were negative for Cryptococcus neoformans, however, C. albicans (two samples from choana), C. famata (one sample from choana) and C. tropicalis (choana) were found. Excretas from bird cages were negative to C. neoformans. Results suggested that birds harbor various pathogenic species of yeast, but not C. neoformans, and the result showed potential danger to carry diseases to humans.

Las levaduras pueden causar diversas enfermedades en el hombre y animales. En las aves, las levaduras están involucradas principalmente en lesiones en el tracto respiratorio y digestivo. Entre las levaduras patogénicas, Cryptococcus neoformans viene destacándose por la alta incidencia de cryptococcus humana en pacientes inmune deprimidos. Así, el objetivo de este estudio fueron identificar C. neoformans y otras levaduras patogénicas en la cloaca y coana de psittacidae y psittaciformes y en excretas colectadas de las jaulas de pajareras. Fueron obtenidas 29 muestras de quince (15) aves manifestando algún señal respiratorio, provenientes del Ambulatorio de Animales Salvajes de la UFPR (n=6) y de la Clínica Veterinaria Vida Livre (n= 23). Las muestras fueron sembradas en Ágar Sabouraud y Ágar Níger y mantenidas a 30ºC hasta 30 días. Todas las colonias fueron analizadas cuanto a la macro y micromorfología. Para aquellas identificadas como levaduras, fueron realizadas las pruebas bioquímicas: asimilación de carbono y nitrógeno, y formación de tubo germinativo para identificación de Candida albicans. Las muestras de excreta de los pajareros (n=8) fueron mezcladas con solución fisiológica conteniendo antibiótico y el sobrenadante fue sembrado en Ágar Níger. Ninguna muestra de las aves presentó resultado positivo para C. neoformans, pero se identificaron muestras positivas para C. albicans (dos muestras de coana), C. famata (una muestra de coana) y C. tropicalis (una nuestra de coana). Las excretas fueron negativas para C. neoformans. Por lo tanto, a pesar de no haber sido aislado C. neoformans, otras levaduras patogénicas fueron aisladas, demostrando que esas aves son posibles transmisoras de enfermedades para los seres humanos.